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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室-無(wú)菌技術(shù)

更新時(shí)間:2022-07-06      點(diǎn)擊次數(shù):1227
無(wú)菌技術(shù)簡(jiǎn)介:

細(xì)胞培養(yǎng)的成功很大程度上取決于保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)菌、真菌和病毒等微生物的污染。非無(wú)菌物品、培養(yǎng)基和試劑、帶有微生物的空氣顆粒、不干凈的培養(yǎng)箱和污染的工作臺(tái)面均是導(dǎo)致微生物污染的來(lái)源。

無(wú)菌技術(shù)的作用是在環(huán)境微生物與無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)物之間形成一道屏障,它通過(guò)一套操作流程來(lái)降低培養(yǎng)物被上述污染源污染的可能。無(wú)菌技術(shù)的組成要素包括:無(wú)菌工作區(qū) 域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基以及無(wú)菌操作。

 

無(wú)菌工作區(qū)域

簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的減少空氣顆粒和氣體揮發(fā)(例如:灰塵、芽抱、皮屑、噴嚏)污染的方 法就是采用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥。

•細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥應(yīng)正確設(shè)置,放置于專門用于細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)域,同時(shí)要避免來(lái)自門、 窗及其他設(shè)備的氣流,不能有直接的來(lái)往通道。

•工作臺(tái)面應(yīng)保持整潔,只放置特定實(shí)驗(yàn)所需的物品;不能用作儲(chǔ)存區(qū)域。

•使用前后均應(yīng)*消毒工作臺(tái)面,周圍區(qū)域和設(shè)備應(yīng)定期清潔。

•常規(guī)清潔時(shí),工作前和工作過(guò)程中,特別是發(fā)生潑濺后,應(yīng)使用70%乙醇擦拭工作 臺(tái)面。

•使用完畢后,可用紫外燈對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)空氣和暴露在外的工作臺(tái)面進(jìn)行消毒。

•在細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥內(nèi)不需要也不建議使用煤氣燈火焰。

•細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥應(yīng)始終保持運(yùn)轉(zhuǎn),長(zhǎng)時(shí)間不使用時(shí)方可關(guān)閉。

 

良好的個(gè)人衛(wèi)生

操作細(xì)胞培養(yǎng)物前后應(yīng)洗手。穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備不僅可保護(hù)您免受危險(xiǎn)品污染,還可降 低皮屑以及衣服上污物和灰塵污染培養(yǎng)物的可能。

 

無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基

 

商品化試劑和培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制以確保其無(wú)菌性,但是在操作過(guò)程中這些產(chǎn)品 可能被污染。應(yīng)遵循以下無(wú)菌操作原則以免污染。必須采用適當(dāng)?shù)臏缇椒ǎɡ纾焊邏?蒸汽、無(wú)菌過(guò)濾)對(duì)實(shí)驗(yàn)室中配制的所有試劑、培養(yǎng)基和溶液進(jìn)行滅菌。

 

無(wú)菌操作

•必須用70%乙醇擦拭雙手和工作區(qū)域。

•在將容器、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥之前,必須用70%乙醇擦拭 其外部。

•不要從試劑瓶或培養(yǎng)瓶中直接傾倒培養(yǎng)基和試劑。

•使用無(wú)菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液體;每支吸管只能使用一次,以 免交叉污染。使用時(shí)方可打開(kāi)無(wú)菌吸管的包裝。吸管應(yīng)始終位于工作區(qū)域內(nèi)。

•試劑瓶和培養(yǎng)瓶用后必須蓋上,用膠帶將多孔板密封起來(lái)或者將其放入重復(fù)密封袋 中,以免微生物和空氣污染物進(jìn)入,污染培養(yǎng)物。

•無(wú)菌培養(yǎng)瓶、試劑瓶、培養(yǎng)皿等物品使用時(shí)方可揭開(kāi)蓋子,不得將其開(kāi)放暴露于環(huán)境 中。操作完成后盡快蓋上蓋子。

•取下蓋子時(shí)應(yīng)將蓋子開(kāi)口朝下放在工作臺(tái)面上。

•必須使用無(wú)菌玻璃器皿和其他設(shè)備。

•進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí)不要說(shuō)話、唱歌或者吹口哨。

•盡快完成實(shí)驗(yàn),以盡量避免污染。


無(wú)菌技術(shù)核對(duì)表

 


工作區(qū)域

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥設(shè)置是否正確?

細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥所在區(qū)域有無(wú)氣流和直接出入通道?

工作臺(tái)面是否整潔?是否僅僅放置了實(shí)驗(yàn)所需的物品?

開(kāi)始工作前用70%乙醇擦拭工作臺(tái)面了嗎?

是否定期對(duì)培養(yǎng)箱、冰箱、冰柜及其他實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行清潔和消毒?

個(gè)人衛(wèi)生

您洗手了嗎?

您穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備了嗎?

如果您留了長(zhǎng)發(fā),您把頭發(fā)扎在后面了嗎?

您是用移液器操作液體嗎?

試劑和培養(yǎng)基

您采用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)實(shí)驗(yàn)室中配制的所有試劑、培養(yǎng)基和溶液進(jìn)行滅菌了嗎?

 

在將容器、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿放入工作臺(tái)面之前,您用70%乙醇擦拭其外部 了嗎?

試劑瓶、培養(yǎng)瓶及其他容器不使用時(shí)蓋緊了嗎?

是否已將所有培養(yǎng)板均放入無(wú)菌重復(fù)密封袋中?

是否有試劑外觀渾濁?是否被污染了?試劑中有漂浮顆粒嗎?有難聞氣味嗎?有顏 色異常嗎?如果出現(xiàn)上述情況,是否已對(duì)其進(jìn)行去污并丟棄?

 

操作

您操作時(shí)是否緩慢、謹(jǐn)慎、注意無(wú)菌技術(shù)了?

在將移液器、試劑瓶和培養(yǎng)瓶放入細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥之前,用70%乙醇擦拭其表面 了嗎?

是否將蓋子口朝下放置在工作區(qū)域?

您是使用無(wú)菌玻璃吸管或者一次性無(wú)菌塑料吸管操作液體嗎?

無(wú)菌吸管是否僅僅使用一次以免交叉污染?

您是否注意到避免使吸管尖-端觸碰到任何非滅菌物品包括瓶口螺紋的外緣?

發(fā)生液體潑濺時(shí)是否立即吸干并用70%乙醇擦拭該區(qū)域?

 

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