SD大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞

Catalogue No.: YLK745

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components 

Operation steps for cell culture

1. 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞；

2. 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；（細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感，消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時(shí)即可終止，禁止消化到細(xì)胞wan全漂浮。混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3. 加入6-8mlwan全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；

4. 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)(建議T25瓶加10-12mlwan全培養(yǎng)基，10cm皿加12-15ml)；

傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%wan全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過(guò)夜后液氮保存。

Tips：

1.      細(xì)胞經(jīng)過(guò)運(yùn)輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的wan全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

2.      細(xì)胞生長(zhǎng)不均時(shí)，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。

3.      細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢時(shí)，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（最高不超過(guò)20%），也可以根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

4.      不同細(xì)胞貼壁性差異比較大，所以消化時(shí)間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準(zhǔn)，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞wan全漂浮。客戶(hù)消化過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞死亡、漂浮、生長(zhǎng)緩慢，不提供免費(fèi)售后服務(wù)。

5.      干冰發(fā)貨均為兩支，客戶(hù)先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶(hù)同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費(fèi)售后服務(wù)。

6.      細(xì)胞狀態(tài)正常時(shí)，應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種，凍存后應(yīng)隨機(jī)抽取一支檢測(cè)凍存效果。我方不對(duì)客戶(hù)凍存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé)，客戶(hù)凍存細(xì)胞死亡不提供免費(fèi)售后服務(wù)。

7.      建議使用本庫(kù)原裝培養(yǎng)體系培養(yǎng)細(xì)胞，其他品牌培養(yǎng)基及血清培養(yǎng)效果無(wú)法保證，培養(yǎng)出現(xiàn)異常不予售后。

Notice：

      客戶(hù)收到細(xì)胞有任何疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)致電我們，細(xì)胞收到后1周內(nèi)沒(méi)有任何電話(huà)，或其他形式回訪，默認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)量沒(méi)問(wèn)題，之后出了任何問(wèn)題不給予免費(fèi)售后。細(xì)胞免費(fèi)售后只提供一次，若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費(fèi)補(bǔ)發(fā)，細(xì)胞收貨時(shí)已經(jīng)死亡或密度不足的除外。