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諾如病毒G1型RT-PCR試劑盒使用說明書

發(fā)布時間:2023/3/5      點擊次數(shù):414

產(chǎn)品及特點:

諾如病毒Norwalk Virus是單股正鏈 RNA 病毒,屬于人類杯狀病毒屬,是一種引起非細菌性急性腸胃炎的病毒,如諾病毒感染性強,以腸道傳播為主,通過口-糞傳播,以污染的水源、食物、貝類、物品、空氣作為主要傳播載體。諾如病毒可分為 G I-G 五個基因群,其中引起人類感染的主要是 G1 和 G2 群。因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品,采用RT-PCR 技術(shù)檢測疑似感染動物血清或組織中的諾如病毒 G1 型。它具有下列特點:

1.       即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。

2.      提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

3.      產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)諾如病毒 G1 RNA高度保守區(qū)設計,不會跟除此之外的其它病毒RNA發(fā)生交叉反應。

4.      RT-PCR mix 中含上樣染料,擴增反應后可以直接上樣電泳。

5.      本產(chǎn)品足夠5020μL體系的PCR反應。

6.      本產(chǎn)品只能用于定性實驗,不能用于定量。

       7.      本產(chǎn)品只能用于科研。


規(guī)格及成分:

 

A

B

C

D

E

使用手冊


注:為避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供專一的核酸片段作為陽性對照。


運輸及保存:

低溫運輸,-20保存,保存期限為12個月。

自備試劑:樣品RNA


使用方法:

一、樣品DNA的制備

1.       如果有N個樣品,必須設置N+2個提取反應,多出的兩個中一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL諾如病毒 G1 PCR陽性對照(1×10E6拷貝/μL,本試劑盒提供)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。

2.      用自選方法純化上述N+2個樣品的DNA。本試劑盒跟市場上大多數(shù)細菌DNA提取試劑盒兼容。

二、設置PCR反應(20μL體系)

3.      標記N+4PCR管,其中N+2個用于上步得到的DNA樣品,額外增加的兩個管一個用于PCR陽性對照,另一個用于PCR陰性對照。按照下表在各PCR管中加入下列成分:

成分/每管

樣品管

N+2

PCR陰性對照

PCR陽性對照

A

10 μL

10 μL

10 μL

D

2 μL

2 μL

2 μL

制備的N+2DNA樣品

7 μL

-

-

C

-

7 μL

-

E

-

-

7 μL

B

1 μL

1 μL

1 μL










4.      上機進行PCRPCR反應參數(shù)為:

過程

溫度

時間

逆轉(zhuǎn)錄

50

20 min

預變性

95℃

10 min

PCR反應

45個循環(huán))

95℃

30 sec

55

60 sec

72

60 sec

延伸

72

7 min










三、電泳分析

5.       5-10uL擴增產(chǎn)物進行常規(guī)瓊脂糖電泳,檢測擴增效果,由于擴增產(chǎn)物較短,建議用1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

6.      陽性樣品預期得到的擴增產(chǎn)物長度為220bp左右。如果兩個陰性對照(樣品制備陰性對照或PCR陰性對照)有此擴增產(chǎn)物,說明環(huán)境污染,則整個實驗無效,不需要分析實驗結(jié)果。

7.      如果所有樣品和PCR陽性對照均無此擴增產(chǎn)物,則說明有系統(tǒng)性的問題(試劑、設備、程序、操作等),需要重復并排查原因。

       8.     如果沒有上述兩種情況,則實驗有效,可以分析樣品的擴增結(jié)果。N+2個樣品中有擴增產(chǎn)物的判定為陽性,無則判定為陰性。


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