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土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(Solid-Acid invertase, S-AI)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/9      點(diǎn)擊次數(shù):387

土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(Solid-Acid invertase, S-AI)試劑盒說明書

                                        微量法100/48

 

   正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

S-AIpH 4.5~5.0(酸性)條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。

測定原理:

S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。

自備用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體50mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×1瓶,4保存;臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用;用不完的試劑4保存;

試劑三:液體10mL×1瓶,4保存;

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

測定步驟和加樣表:

 

試劑名稱(μL

測定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g

0.05

0.05

試劑一


400

試劑二

400


混勻, 37準(zhǔn)確水浴30min,95水浴10min(蓋緊,以防水分散失),流水冷卻后

充分混勻(以保證濃度不變),10000g 25離心10min,取上清液

上清液

200

200

試劑三   

100

100

混勻,95水浴10min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻, 510nm處,記錄各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸餾水稀釋后測定(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),ΔA=A測定-A對(duì)照。

 

S-AI活性計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)S-AI活力單位。

S-AI活力(mg/d /g土樣)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)

V反總:反應(yīng)體系總體積:0.4mLT:反應(yīng)時(shí)間,1/48d; W:樣本質(zhì)量,0.05g;1mg=1000μg。

 

b.96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL),y為吸光值。

 

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)S-AI活力單位。

S-AI活力(mg/d/g土樣)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V反總÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)

V反總:反應(yīng)體系總體積:0.4mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1/48d; W:樣本質(zhì)量,0.05g1mg=1000μg。


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