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土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶(S-FDA)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/10      點(diǎn)擊次數(shù):449

土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶(Soil-Fluorescein diacetate,S-FDA)試劑盒說明書

 

微量法 100T/48S

 

   正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化,是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。

 

測定原理:

FDA 是一種無色化合物,在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解,并經(jīng)脫水反應(yīng),產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素,穩(wěn)定不易被分解,并在 490nm 處有強(qiáng)吸收峰,通過檢測 490nm 處的吸光值變化可計(jì)算得FDA 水解酶活性。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

 

試劑組成和配制:

標(biāo)準(zhǔn)液:液體 4mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑 1 瓶,-20℃避光保存,臨用前加 4mL 試劑三溶解。

試劑三:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。

 

樣本處理:

稱取風(fēng)干過 30-50 目篩土壤約 0.1g,備用。

 

測定操作表:

 


空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

對照管

測定管

樣本(g



0.05

0.05

標(biāo)準(zhǔn)液(μL


40



雙蒸水(μL

40




試劑一(μL

200

200

240

200

試劑二(μL




40

充分混勻,30℃,震蕩 1h

試劑三(μL

160

160

160

160

10000g25℃,離心 5min,取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測定 490nm 處吸

光值A,△A1=A   標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管,△A2=A 測定管-A   對照管

 

意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

 

酶活性計(jì)算公式

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

S-FDA 活性(μmol/d/g 土樣)=(△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品)×V 反總÷W

= 0.96×(△A2÷△A1)÷W

 

b. 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

S-FDA 活性(μmol/d/g 土樣)=(△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品)×V 反總÷W

= 0.96×(△A2÷△A1)÷W

 

C 標(biāo)準(zhǔn)品:

標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μmol/LV 反總:反應(yīng)總體積,0.4mLW:樣本質(zhì)量,g

 

注意事項(xiàng):

1.盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品,否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。

2.測定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值較高,請進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。


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