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土壤脂肪酶(Solid-Lipase,S-LPS)活性試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/10/11      點擊次數(shù):374

土壤脂肪酶(Solid-Lipase,S-LPS)活性試劑盒說明書

                                                  微量法100/96S

 

    正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

LPS又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。

 

測定原理:

LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計算LPS活性。

 

自備儀器和用品:

研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL冰和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體65mL×2,4保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

試劑三:甲苯80mL×1瓶,4保存(自備)。

試劑四:液體10mL×1瓶,4保存。

標準品:液體10 μL×1瓶,10 µmol/mL的標準溶液,4保存。臨用前加入3.168 mL甲苯,充分溶解。

 

樣本處理

建議稱取約0.1g土樣,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿,再用回旋式振蕩器振蕩提取15min4℃,4000g離心10min,取上清待測。

 

S-LPS測定操作:

1.        分光光度計/酶標儀預熱30 min,調(diào)節(jié)波長到710 nm,蒸餾水調(diào)零。

2.        試劑一和試劑二置于37水浴預熱30min。

3.        1.5mL EP管中依次加入下列試劑

試劑名稱(μL

空白管

測定管

蒸餾水

150


樣本


50

試劑一

300

300

試劑二


100

37振蕩反應(yīng)10 min

試劑三

800

800

37振蕩反應(yīng)10 min后,8000g25,離心10min,取上清液

試劑名稱(μL

空白管

測定管

標準管

上清液

400

400


標準品



400

試劑四

100

100

100

37振蕩反應(yīng)5 min后,靜置5min,取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板,于710nm處測定吸光值。

注意:空白管和標準管只需測定一次。

 

S-LPS活性計算公式:

活性單位定義:37中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C標準品×(A測定管-A空白管A標準管- A空白管)]×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標準管- A空白管)]÷W

C標準品:10 µmol/mL;V反總:反應(yīng)總體積,0.8mL;V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL; W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時間,10 min


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