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土壤中性蛋白酶(S-NPT)試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/10/12      點(diǎn)擊次數(shù):405

土壤中性蛋白酶(S-NPT)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                          微量法100/48

 

   正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化,其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-NPT在中性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解,與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。

 

測(cè)定原理:

中性條件下,S-NPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán);在680nm有特征吸收峰。

 

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水

 

試劑組成和配置:

試劑一液體20mL×1瓶,4保存;

試劑二粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解;用不完的試劑4保存;

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入2mL試劑七,沸水浴加熱溶解,然后加入8ml試劑一,充分混勻備用,用不完的試劑4保存;

試劑四粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑4保存;

試劑五:液體8mL×1瓶,4保存;

試劑六:液體1.5mL×1支,0.05mg/ml標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液,4℃保存;

試劑七:液體5mL×1瓶,4保存;

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。

 

測(cè)定操作:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至680nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定:

試劑名稱

測(cè)定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g

0.02

0.02

試劑一(μL


150

試劑三(μL

150


混勻后,40℃水浴30min,振蕩5-6次,使土樣與反應(yīng)液充分接觸

試劑二μL

         50

         50

混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液,在EP管中加入下列試劑


測(cè)定管

對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)管

上清液(μL

60

60


試劑六(μL



60

試劑四(μL

280

280

280

試劑五(μL

60

60

60

混勻,40℃水浴20min,8000g 25離心10min,取上清液200μL,680nm下讀取各管吸光值A

注意標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

S-NPT活性計(jì)算:

單位定義:每天g土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個(gè) S-NPT活力單位

S-NPT(mg/d/g土樣)=C標(biāo)準(zhǔn)×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管×V反總÷W÷T=24×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管

C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.05mg/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.4mLT:反應(yīng)時(shí)間,30min=1/48d; W:樣本質(zhì)量,0.02g。


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