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血磷濃度檢測試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/10/17      點擊次數(shù):352

血磷濃度檢測試劑盒說明書

                                                   微量法100T/96S

 

 

    意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

血磷主要指血中的無機磷,以無機磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切,在以mg/dL表示時,二者的乘積(Ca×P)3040。當(dāng)(Ca×P)>40,則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織;若(Ca×P)<35則妨礙骨的鈣化,甚至可使骨鹽溶解,影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。

 

測定原理:

去除血清中有機磷后,無機磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸,被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色,在620nm有光吸收;通過測定620 nm吸光度,計算血液中磷含量。

 

自備儀器和用品:

離心機、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

 

試劑組成和配置:

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體1.6mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前配制,依次加入11mL蒸餾水充分溶解,再加入試劑二,充分混合。

標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1支,1 mmol/L無機磷,4℃保存。

 

血磷濃度測定操作:

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到620 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液,室溫解凍。

3. 血清預(yù)處理:吸取50 μL血清,加950μL試劑一,混勻后室溫8000rpm,離心10min,取上清液,待測。

4. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL蒸餾水,50μL試劑一,100μL試劑三,混勻后靜置10min,于620 nm測定吸光度,記為A空白管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液,50μL試劑一,100μL試劑三,混勻后靜置10min,于620 nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

6. 測定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL上清液,50μL試劑一,100μL試劑三,混勻后靜置10min,于620 nm測定吸光度,記為A測定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

 

血磷濃度計算:

血磷含量(mmol/dL=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=2×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

 

C標(biāo)準(zhǔn)液:1 mmol/L;樣品稀釋倍數(shù):(50 μL血清+950μL試劑一)÷50 μL血清=20;V樣總:100 mL=0.1 L。

 

注意事項:

1、   試劑三需臨用前配制,如未用完,4℃保存,最多可使用3天;

2、   測定過程中,應(yīng)盡量避免溶血,因為紅細(xì)胞中有機磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無機磷含量增高。

3、   Z低檢出限為10μmol/L。


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