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總糖含量試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/23      點(diǎn)擊次數(shù):381

總糖含量試劑盒說明書

                                       微量法 100管/96樣

 

注   意 :正式測定前請選擇2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。總糖也可稱為碳水化合物,包括可溶性的單糖,二糖以及不溶性的淀粉,纖維素,幾丁質(zhì)等。

 

測定原理:

總糖酸水解為還原糖,在NaOH和丙三醇存在下,DNS試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物,在過量的NaOH堿性溶液中呈桔紅色,在540nm處有最大吸收峰,以此測定樣品中的總糖含量。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、沸水浴、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:液體100mL×1瓶 ,4℃保存;

試劑三:液體5mL×1瓶 ,4℃避光保存;

 

樣品中總糖的提取:

組織:稱取約0.1g樣品,加入1mL 試劑一,1.5mL蒸餾水,勻漿,95℃水浴中加熱30min,加入1mL試劑二,混勻,用蒸餾水定容至10mL,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項(xiàng))

液體樣本:取0.1mL樣本,加入1mL 試劑一,1.5mL蒸餾水,勻漿,95℃水浴中加熱30min,加入1mL試劑二,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項(xiàng))

 

測定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、加樣表:

試劑(μL)

空白管

測定管

樣本


8

蒸餾水

16

8

試劑三

12

12

混勻,置95度水浴中10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫

蒸餾水

 172

172

混勻,540nm測定吸光值,ΔA=A測定管-A空白管

注意:1、空白管只要做一管。

       2、如果ΔA大于2,需要將上清液用蒸餾水稀釋,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 

總糖含量計(jì)算:

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.3002x - 0.0507;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、按樣本鮮重計(jì)算:

總糖(mg /g鮮重)= [(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(W×V1÷V2)×稀釋倍數(shù)=33.311×(ΔA+0.0507) ÷W×稀釋倍數(shù)。

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算:

總糖(mg /mg prot)=[(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀釋倍數(shù)=3.3311×(ΔA+0.0507) ÷Cpr×稀釋倍數(shù)。

V1:加入樣本體積,0.008mL;V2:加入提取液體積,10mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。

4、按照液體體積計(jì)算:

總糖(mg /mL)=[(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V3×V1÷V2)×稀釋倍數(shù)=116.59×(ΔA+0.0507)×稀釋倍數(shù)。

V1:加入樣本體積,0.008mL;V2:加入提取液體積,10mL/3.5mL; V3:液體樣本,0.1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。

 

注意:Z低檢測限為1mg/g鮮重或10ng/mg prot


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