精品人妻伦一二三区久久,国产精品久久无码不卡黑寡妇 ,小小水蜜桃在线观看视频,天堂…在线最新版资源

您好!歡迎訪問優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

15021281375

當(dāng)前位置:首頁 > 資料下載 > 磷酸丙糖異構(gòu)酶(Triose-phosphate isomerase,TPI)試劑盒說明書

磷酸丙糖異構(gòu)酶(Triose-phosphate isomerase,TPI)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/10/25      點擊次數(shù):399

磷酸丙糖異構(gòu)酶(Triose-phosphate isomerase,TPI)試劑盒說明書

                                                     微量法100T/96S

 

注   意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

植物葉綠體中磷酸丙糖異構(gòu)酶是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮之間的轉(zhuǎn)化,磷酸二羥丙酮能快速透過葉綠體的包膜進入細胞質(zhì),并在其中逐步轉(zhuǎn)化為蔗糖。

 

測定原理:

磷酸丙糖異構(gòu)酶將磷酸二羥丙酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛與NAD在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構(gòu)酶的活性的高低。

 

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、研缽、震蕩儀、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

 

試劑組成和配制:  

提取液一:液體100mL×1瓶,4℃保存。

提取液二:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體12mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑三:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加2 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑四:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加2 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

 

酶液提取:

①總TPI酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。

②胞漿和葉綠體TPI酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿TPI酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中TPI酶活性。

建議測定總TPI酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的TPI,則按照步驟②提取粗酶液。

 

測定操作:

1.        分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

 

2.  取微量石英比色皿/96孔板,依次加入120μL試劑一,20μL試劑二,20μL試劑三,20μL試劑四,20μL粗酶液,充分混勻,記錄340nm處10s的吸光值A(chǔ)1和310s的吸光值A(chǔ)2,△A=A2-A1

 

 

計算公式:

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1)按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義:每克組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI(nmol/min/g 鮮重)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g

 

b.       用96孔板測定的計算公式如下

(1)按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T= 643.08×ΔA÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義:每克組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI(nmol/min/g 鮮重)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T= 643.08×ΔA÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息
男生和女生一起打扑克| 国产睡熟迷奷系列精品| 我的世界珍妮视频完整版在线观看 | 国产精品久久久久久人妻| free性满足vide0shd| 男女做爰猛烈叫床视频动态图| 中文字幕人妻紧无码专区| 少妇真人直播app| 国产午夜福利片| 性乌克兰18videos少妇| 国产精品欧美一区二区三区| 亚洲色欲色欲www在线成人网| 国产精品欧美一区二区三区| 久久精品无码AV| 老太bbw搡bbbb搡bbbb| 亚洲AV中文无码字幕色| 久久亚洲AV成人无码| 玩弄老年妇女过程| 亚洲AV无码国产精品色午友在线 | 日本人妻伦在线中文字幕| 欧美精品无码喷液av高潮 | 刺激的至亲乱45部| 人人妻人人爽人人做夜欢视频| 97在线 | 亚洲| 国产精品视频一区二区| 日韩AV无码一区二区三区| 偷窥美女洗澡一区二区三区| 精品人妻无码一区二区三区淑枝| 张开腿让我尿在里面(h)| 一本一道色欲综合网中文字幕| 亚洲熟女乱色综合亚洲图片| 熟妇高潮精品一区二区三区| 五月丁香欧美综合亚洲av| 解开她的内衣含着她的柔软| 亚洲色无码a片一区二区潘甜甜| 国产精品免费无遮挡无码永久视频 | 国产嫖妓一区二区三区av视频| 精品亚洲AV无码一区二区| 50岁退休熟女露脸高潮| 国产69久久精品成人看| 日韩在线视频|