精品人妻伦一二三区久久,国产精品久久无码不卡黑寡妇 ,小小水蜜桃在线观看视频,天堂…在线最新版资源

您好!歡迎訪問(wèn)優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)咨詢熱線:

15021281375

當(dāng)前位置:首頁(yè) > 資料下載 > 脫氫抗壞血酸還原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)試劑盒說(shuō)明書(shū)

脫氫抗壞血酸還原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/10/29      點(diǎn)擊次數(shù):424

脫氫抗壞血酸還原酶dehydroascorbate reductase,DHAR試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                                   微量法100T/96S

 

    意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

DHAR存在于細(xì)胞質(zhì)、線粒體和葉綠體中。DHAR催化GSH還原DHA生成AsAGSSG,調(diào)控細(xì)胞AsA/DHA比值,是抗壞血酸-谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶。提高植物體內(nèi)的 DHAR 活性,可提高植物食品中AsA含量,進(jìn)而提高植物食品的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。

 

測(cè)定原理:

DHAR催化GSH還原DHA生成AsA,通過(guò)測(cè)定DHA減少速率,計(jì)算DHAR活性。

 

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備:

研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體17.5mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃保存。臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解。

 

粗酶液提取:

1.        按照組織質(zhì)量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);8000g 4離心20min,取上清液置冰上混勻待測(cè)。

3.  血清等液體:直接測(cè)定。

 

DHAR測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到265nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min

3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL試劑三、20μL試劑四和140μL 試劑二,最后加20μL上清液迅速混勻后于265nm比色,記錄30s150s的吸光值A1A2,A=A2-A1

 

DHAR活性計(jì)算公式:

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

 

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

 

DHAR(nmol/min/mg prot) = A÷ε÷d×V反總×109÷(Cpr×V)÷T

= 92×A ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/g 鮮重) = A÷ε÷d×V反總×109÷(W×V÷V樣總)÷T

= 92×A ÷W

(3). 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/104 cell) = A÷ε÷d×V反總×109÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

= 92×A ÷細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫升樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/mL) = A÷ε÷d×V反總×109÷V÷T

= 92×A

ε AsA265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol /cm;106:摩爾分子換算成微摩爾分子;d:比色杯光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL=2×10-4 L;V樣:反應(yīng)體系中加入上清液體積,20μL =0.02mL;V樣總:提取液體積,1 mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/mg prot) = A÷ε÷d×V反總×109÷(Cpr×V)÷T

= 184×A ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/g 鮮重) = A÷ε÷d×V反總×109÷(W×V÷V樣總)÷T

= 184×A ÷W

(3). 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/104 cell) = A÷ε÷d×V反總×109÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

= 184×A ÷細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫升樣本每分鐘還原生成1nmol AsA 1個(gè)酶活單位。

DHAR(nmol/min/mL) = A÷ε÷d×V反總×109÷V÷T

= 184×A

ε AsA265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol /cm;106:摩爾分子換算成微摩爾分子;d96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL=2×10-4 LV樣:反應(yīng)體系中加入上清液體積,20μL =0.02mL;V樣總:提取液體積,1 mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min。

 

注意事項(xiàng):

 

臨用前配制的試劑未使用完的4保存,3天內(nèi)使用完。


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號(hào)1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)
了解更多信息
老卫抱着淑蓉进房间第八集视频| 天天做天天爱夜夜爽毛片毛片 | 阿娇张开双腿实干十三分钟| 99久久国产热无码精品免费| 丰满少妇被猛烈进入| 久久精品无码一区二区日韩av| 久久精品无码AV| 久久精品国产亚洲AV日韩| 最近高清中文字幕免费MV| 色欲TV国产亚洲AV麻豆| CHINESE老女人老熟妇HD| 成人在线免费电影| 好姑娘在线观看完整视频高清| 老妇性hqmaturetube| 可以自由侵犯的游戏| 女人的选择hd中字| 成人精品一区二区三区不卡免费看| 国产精品亚洲一区二区三区在线| 果冻传媒剧国产MV在线观看| 亚洲AV片在线观看| 欧美熟妇另类久久久久久不卡| 少妇又紧又色又爽又刺激视频| 无码av久久久久久久久| 男ji大巴进入女人的视频| 国产精品jizz在线观看| 扒开少年白嫩的屁股动态图| 熟妇中国 @TUBE UMTV| 国产精品国产三级国产AV主播| 99久久国产综合精品麻豆| ぱらだいす天堂中文WWW最新版| 老师黑色双开真丝旗袍恩施视频 | 娇妻被交换粗又大又硬无| 白洁少妇全文无删减在线阅读| 国内精品乱码卡一卡2卡三卡| 人禽无码做爰在线观看| 久久99精品久久久久久无毒不卡| 欧洲精品久久久AV无码电影| 亚洲精品乱码久久久久久自慰| 野花香视频在线观看免费| 女性私密紧致按摩| 无码人妻丰满熟妇区96|