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植物類黃酮(Flavonoid)試劑盒說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2023/11/8      點(diǎn)擊次數(shù):1061

植物類黃酮(Flavonoid)試劑盒說(shuō)明書

                                                    微量法100/96



    意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

類黃酮是一類多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對(duì)人體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內(nèi)羥自由基,預(yù)防癌癥等作用。

 

測(cè)定原理:

在堿性亞硝酸鹽溶液中,類黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物,測(cè)定樣品提取液在510nm處的吸光值,即可計(jì)算樣品類黃酮含量。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

提取液:60%乙醇,自備。

試劑一:液體1mL×1管,4℃保存。

試劑二:液體1mL×1管,4℃保存。

試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。

 

類黃酮提?。?/span>

將樣本烘干至恒重,粉碎,過(guò)40目篩之后,稱取約0.02g,加入2mL提取液,60℃振蕩提取2h10000g,25℃,離心10min,取上清待測(cè)。

 

測(cè)定操作表:

1、   分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至510nm,蒸餾水調(diào)零。

2、   操作表


空白管

測(cè)定管

樣本待測(cè)液(µL


108

蒸餾水(µL

108


試劑一(µL

6

6

混勻,25靜置6min

試劑二(µL

6

6

混勻,25靜置6min

試劑三(µL

80

80

混勻,25靜置15 min,測(cè)定510nm處吸光值。ΔA=A測(cè)定-A空白,空白管只要做一管。

 

 

類黃酮含量計(jì)算公式:

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 5.02x+0.0007R2 = 0.9996  

類黃酮含量(mg/g 干重)=ΔA -0.0007÷5.02÷(W÷V樣總)= 0.398×ΔA -0.0007÷W

V樣總:加入提取液體積,2.5mL; V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.108mL; W:樣品質(zhì)量,g

 

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 2.51x+0.0007,R2 = 0.9996

類黃酮含量(mg/g 干重)=ΔA -0.0007÷2.51÷(W÷V樣總)= 0.797×ΔA -0.0007÷W

V樣總:加入提取液體積,2mL;V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.108mL;W:樣品質(zhì)量,g

Z低檢出限為10µg/g


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