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硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒

簡要描述:硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒測定意義:TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR 與 GR 活性類似,催化 GSSG 還原生成 GSH,是谷胱/甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。

  • 更新時(shí)間:2024-06-29
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:890

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIOCAS詳見說明書
分子式詳見說明書純度詳見說明書
分子量詳見說明書貨號YLK-SH127
規(guī)格100管/96樣、50管/48樣供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
測定方法:微量法、可見分光光度法

硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒說明書

 

微量法100T/96S

 

 

注 意:正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

 

 

測定意義:

 

TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR GR 活性類似,催化 GSSG 還原生成 GSH,是谷胱/甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。

 

 

測定原理:

 

TrxR 催化 NADPH 還原 DTNB 生成 TNB NADP+,TNB 412 nm 有特征吸收峰,通過測定 412nm 波長處 TNB 的增加速率,即可計(jì)算 TrxR 活性。

 

自備儀器和用品:

 

低溫離心機(jī)、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。

 

 

試劑組成和配制:

 

試劑一:液體 120mL×1 瓶,4保存。

 

試劑二:液體 2mL×1 瓶,4避光保存。

 

試劑三:粉劑×1 管,4保存。臨用前加入 2mL 蒸餾水溶解。

 

 

粗酶液提取:

 

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4離心 10min,取上清置冰上待測。

 

2.        細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 8000g,4,離心 10min,取上清置于冰上待測。

 

3.        血清等液體:直接測定。

 

 

TrxR 測定操作:

 

1.    分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 412nm,用蒸餾水調(diào)零。

 

2.    試劑一在 25(一般物種)或者 37(哺乳動物)預(yù)熱 30min。

 

3.    空白管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μL 試劑二,20μL 試劑三,160μL 試劑一,迅速混勻后于 412 nm 測定 10 s 310 s 吸光度,記為 A1 A2。A 空白管=A2-A1。

 

4.    測定管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μL 試劑二,20μL 試劑三,140μL 試劑一, 20μL 上清液,迅速混勻后于 412 nm 測定 10 s 310 s 吸光度,記為 A3 A4。A 測定管

 

=A4-A3。

 

注意:空白管只需測定一次。

 

 

TrxR 活性計(jì)算公式:

 

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。

 

TrxRnmol/min /mg prot=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(Cpr×V )÷T = 147×A 測定管-A 空白管)÷Cpr

 

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。

 

 

TrxRnmol/min /g 鮮重)=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(W×V ÷V 樣總)÷T

 

 

 

=  147×A 測定管-A 空白管)÷W

 

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶

 

活單位。

 

TrxRnmol/min/104 cell=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V ÷V

 

)÷T

 

= 147×A 測定管-A 空白管)÷ 細(xì)胞數(shù)量

 

4)按液體體積計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。

 

TrxRnmol/min /mL=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷V ÷T

 

=  147×A 測定管-A 空白管)

 

εTNB 412nm 處的微摩爾消光系數(shù),0.0136 L/μ mol/cmd:比色皿光徑,1cmV 反總:

 

反應(yīng)體系總體積(L),200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;

 

W     :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL),20μL=0.02 mLV 樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),5 min。

 

b.使用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

 

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活

 

單位。

 

TrxRnmol/min /mg prot=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(Cpr×V )÷T

 

=   294×A 測定管-A 空白管)÷Cpr

 

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。

 

TrxRnmol/min /g 鮮重)=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(W×V ÷V 樣總)÷T

 

=  294×A 測定管-A 空白管)÷W

 

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶

 

活單位。

 

TrxRnmol/min/104 cell=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V ÷V

 

)÷T

 

= 294×A 測定管-A 空白管)÷ 細(xì)胞數(shù)量

 

4)按液體體積計(jì)算

 

活性單位定義:在 25或者 37中,每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。

 

TrxRnmol/min /mL=A 測定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷V ÷T

 

=  294×A 測定管-A 空白管)

 

εTNB 412nm 處的微摩爾消光系數(shù),0.0136 L/μ mol/cm;d96 孔板光徑,0.5cm;V 反總:反應(yīng)體系總體積(L),200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL),20μL=0.02 mL;V 樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),5 min

 

注意事項(xiàng):

1.        測定前須先取 12 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),使得吸光值在 5min 內(nèi)程線性變化。哺乳動物組織及血液制品 TrxR 活力測定時(shí),一般須用蒸餾水稀釋 5 倍左右;測定過程操作須迅速。

2.        試劑二和試劑三配制好后 3 天內(nèi)使用完。

硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒僅供科研!

 

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