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Hep G2/LUC 人肝癌細胞熒光素酶標記

簡要描述:Hep G2/LUC 人肝癌細胞熒光素酶標記該細胞系來自15歲男性白人的組織。形態(tài)為上皮形,模式染色體數(shù)為55,在免疫抑制小鼠中不致瘤。
該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

  • 更新時間:2024-07-13
  • 廠商性質:生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:330

詳細介紹

品牌ATCC貨號YLK-XB1625h
規(guī)格1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研應用領域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱Hep G2/LUC

Hep G2/LUC 人肝癌細胞熒光素酶標記


細胞特性:

1) 來源:肝細胞癌

2) 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長

3) 含量:>1x106  細胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。


細胞篩選

該細胞為已經(jīng)構建好的穩(wěn)定轉染Luc的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完培維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完培繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完培正常培養(yǎng)。


運輸和保存:

干冰運輸及復蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。


細胞接收后的注意事項:

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完培6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。


培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備MEM培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

培養(yǎng)注意事項:1. hepg2細胞復蘇或傳代后會有少部分的細胞貼壁和部分懸浮的細胞,復蘇兩天后細胞會從貼壁細胞向外開始生長,有時細胞再生長過程中,細胞會再貼壁細胞的上方生長,形成不同的細胞層,這種情況會有發(fā)生。 在細胞復蘇的一周內(nèi),培養(yǎng)瓶中 通常會有懸浮的活的細胞團,在換液過程中不要丟棄在這些活的懸浮細胞,可以通過離心(125×g)回收細胞,重新打回到培養(yǎng)瓶中,分離或者丟棄漂浮的活細胞會使細胞數(shù)量變少,引起細胞的停滯生長或細胞死亡。

2.培養(yǎng)條件的細微變化,尤其是pH和培養(yǎng)基中血清的質量,可能會影響細胞的生長狀況,在細胞的生長過程中會有細胞內(nèi)的液泡出現(xiàn),特別在細胞快要融合是會出現(xiàn)這種情況。培養(yǎng)細胞時使用未被滅活的高質量、低內(nèi)毒素的胎牛血清,可以使細胞更好的貼壁和形成單層細胞。

3. 細胞在生長過程中可以通過將血清濃度提到到20%來改善細胞生長緩慢的情況。(參考atcc 有關該細胞的描述)

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。


細胞處理:

1) 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。


Hep G2/LUC 人肝癌細胞熒光素酶標記

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