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植物葉綠素(chlorophyll)含量試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/9/19      點擊次數(shù):363

植物葉綠素(chlorophyll)含量試劑盒說明書

微量法100T/96S

 

    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中,其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關,是反應植物生長狀況的重要指標。

 

測定原理:

葉綠素a和葉綠素b645nm663nm處有最大吸收,根據(jù)經(jīng)驗公式可計算得葉綠素a和葉綠素b以及總葉綠素含量。

 

自備實驗用品及儀器:

天平、研缽、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板10mL玻璃試管、錫箔紙、丙酮。

 

試劑組成和配制:   

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。         

 

測定操作:

1.        稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織,去掉中脈,稱取約0.1g,剪碎,用蒸餾水洗干凈。

2.        提取液的準備:取240mL蒸餾水和960mL丙酮,充分混勻待用。

3.        加入1mL蒸餾水,少量試劑一(約50mg),在黑暗或弱光條件下充分研磨,轉入10mL玻璃試管。

4.        用提取液沖洗研缽,將所有沖洗液轉入玻璃試管,用提取液補充至10mL,玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h,觀察試管底部組織殘渣wan全變白則提取wan全,若組織殘渣未wan全變白,繼續(xù)浸提至其wan全變白。

5.        取浸提液200μL微量石英比色皿/96孔板,提取液調零,測定663nm645nm處吸光值,分別記為A663A645

 

計算公式:

葉綠素a含量(mg/g 鮮重)=12.7× A6632.69 × A645×V×D÷m÷1000

                    = 0.01×12.7× A6632.69 × A645×D÷m

葉綠素b含量(mg/g 鮮重)=22.9× A6454.68 × A663×V×D÷m÷1000

                    = 0.01×22.9× A6454.68 × A663×D÷m

葉綠素總含量(mg/g 鮮重)=20.21× A645 +8.02 × A663×V×D÷m÷1000

                    = 0.01×20.21× A645 +8.02 × A663×D÷m

V提:提取液體積,10mL;D:稀釋倍數(shù);m:樣本質量,g

 

注意事項:

1.        葉綠素對光敏感,研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進行。

2.        一定要浸提至組織殘渣wan全變白,否則提取不充分。

3.        用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質被轉移至玻璃試管。

 

        4.  測定時吸光值超過1,可進行適當稀釋。


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