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土壤β-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase, S-β-XYS)測定試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/9/21      點擊次數(shù):376

土壤β-木糖苷酶Solid-β- xylosidase, S-β-XYS測定試劑盒說明書

                                                    微量法100T/48S

 

   正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶,產(chǎn)物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應用價值。

 

測定原理:

S-β-XYS催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚,對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰,測定405nm光吸收增加速率,可計算S-β-XYS活性。

 

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體1mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。

 

粗酶液提?。?/span>

0.1g鮮土或風干土樣,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,室溫振蕩提取30min,然后10000g,4,離心10min,取上清待測。

 

測定操作表:

1、   分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長至405nm

2、   操作表


對照管

測定管

樣本(μL

40

40

試劑一(μL


10

試劑二(μL

80

70

混勻,45℃水浴20min

試劑三(μL

80

80

混勻,靜置5min405nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。

 

 

β-木糖苷酶活性計算公式:

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

 

標準曲線:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y吸光值ΔA。

酶活定義:每克土樣每天催化產(chǎn)生mol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土樣)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V÷V樣總×W)÷T

=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL W:樣品質(zhì)量,gT:反應時間,20min=1/72d;

 

b.96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y=6.613x+0.0011,R2=0.9998x為標準品濃度(μmol/mL),y吸光值ΔA

酶活定義:每克土樣每天催化產(chǎn)生mol對硝基苯酚的酶量為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土樣)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V÷V樣總×W)÷T

=32.66×(ΔA-0.0011)÷W

V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL W:樣品質(zhì)量,g;T:反應時間,20min=1/72d;

ΔA控制在0.01-1范圍內(nèi),若ΔA大于1,可適當減小樣本量。

標準曲線線性范圍為:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。



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