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土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/9/20      點(diǎn)擊次數(shù):354

土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)試劑盒說明書

                                         微量法100/48

 

   正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:                           

S-α-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。

 

測(cè)定原理:

S-α-GC能夠催化對(duì)-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。

 

自備用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:甲苯5mL×1瓶,4保存;(自備)

試劑二:粉劑×1瓶,-20保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20保存;

試劑三:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑四:液體15mL×1瓶,4保存;

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

 

測(cè)定步驟:

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm,蒸餾水調(diào)零。

2、  加樣表

試劑名稱

測(cè)定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g

0.02

0.02

試劑一(μL

10

10


室溫振蕩混勻15min

90℃振蕩混勻15min

試劑二(μL

130


蒸餾水


130

試劑三(μL

160

160

混勻, 37振蕩反應(yīng)1h90水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻,

10000g 25離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)

上清液μL

70

70

試劑四μL

130

130

充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測(cè)定吸光值A,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)

 

一個(gè)對(duì)照管。

 

S-α-GC活力計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0032x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

S-α-GC活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質(zhì)量,0.02g。

 

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0016x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。

S-α-GC活力(μmol/d /g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4 LW:樣本質(zhì)量,0.02g。



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