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土壤纖維素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/10      點(diǎn)擊次數(shù):397

土壤纖維素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

                                          微量法100/48

 

 

   正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

S-CL主要來(lái)源于土壤微生物,S-CL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

 

測(cè)定原理:

采用蒽酮比色法測(cè)定S-CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

 

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:甲苯10mL×1瓶,4保存;(自備)

試劑二:液體6mL×1瓶,4保存;

試劑三:液體40mL×1瓶,4保存;

試劑四:粉劑×1瓶,4保存; 臨用前加入5mL蒸餾水和45mL濃硫酸充分溶解待用。

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。

 

加樣表和測(cè)定步驟:


對(duì)照管

測(cè)定管

風(fēng)干土樣(g

0.05

0.05

試劑一 (μL)

50

50

振蕩混勻15min

試劑二(μL


90

試劑三(μL

370

370

蒸餾水(μL

180

90

37振蕩反應(yīng)3h后,90℃水浴15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后

8000g 25℃離心10min,取上清,得糖化液

糖化液 (μL)

140

140

試劑四 (μL)

260

260

混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,測(cè)620nm下吸光值A,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

 

S-CL活力計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL,y吸光。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T:反應(yīng)時(shí)間,3h=1/8d V反總:反應(yīng)體系總體積:0.6mL;W:樣本質(zhì)量,0.05g。

 

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.5090x - 0.0462;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL,y吸光

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷2.5090×V反總÷W÷T =38.3×(ΔA+0.0462)

T:反應(yīng)時(shí)間,3h=1/8d; V反總:反應(yīng)體系總體積:0.6mLW:樣本質(zhì)量,0.05g。


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