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土壤硝酸還原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/10/10      點擊次數(shù):391

土壤硝酸還原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)試劑盒說明書

                                          微量法100/48

 

 

   正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究S-NR的活性對合理施肥,降低氮素的損失具有重要意義。

 

測定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H NO2ˉ +NAD +H 2 O;產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法測定。

 

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制

試劑一:液體12mL×1瓶,-20保存。

試劑二:液體8mL×1瓶,-20保存

試劑三:液體9mL×1瓶,4保存(如出現(xiàn)結(jié)晶析出,60-90℃水浴溶解后使用)。

試劑四:液體9mL×1瓶,4保存。 

試劑五:標(biāo)準(zhǔn)品儲備液1mL,-20保存。

0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液的配制:用時將試劑五稀釋100倍,即取 0.1ml 加蒸餾水定容至 10ml。

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

 

測定步驟

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

試劑名稱

1mL帶蓋離心管

測定管

對照管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

風(fēng)干土樣(g

0.06

0.06



0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液(μL



60


蒸餾水(μL


225


285

試劑一(μL

225


225


試劑二(μL

75

75

75

75

      混勻后,蓋蓋后37℃水浴24h,8000g 25離心10min,取上清液

上清液(μL

130

130

130

130

試劑三(μL

85

85

85

85

試劑四(μL

85

85

85

85

混勻,25℃顯色20min4000g,25℃離心10min,取200uL上清液至微量石英比色皿或96孔板中,540nm下讀取各管吸光值標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。

注意點:務(wù)必先做2個樣本的預(yù)測定,少部分土壤由于樣本特殊性可能出現(xiàn)測定管小于對照管,請及時與我司技術(shù)支持聯(lián)系,以獲得針對樣本特殊性的調(diào)整測定方法。

 

S-NR活性計算:

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1μmol NO2ˉ的量為一個 S-NR活力單位。

S-NRμmol /d/g土樣=C標(biāo)準(zhǔn)×A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總÷W÷T =0.5×A測定管-A對照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.1μmol/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.3mL;T:反應(yīng)時間,24h; W:樣本質(zhì)量,0.06g。


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