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一步式染料法qRT-PCR試劑盒

簡要描述:一步式染料法qRT-PCR試劑盒是基于熒光染料檢測的即用型 RT-PCR 試劑盒,可以對靶 RNA 分子進行實時定量RT-PCR 分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。

  • 更新時間:2024-06-28
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:1200

詳細介紹

品牌YLKBIO純度詳詢
貨號YLK10358P規(guī)格50T
供貨周期現(xiàn)貨主要用途科研實驗
應用領域化工,生物產(chǎn)業(yè)中文名稱:一步式染料法qRT-PCR試劑盒
英文名稱:One-Step?SYBR?qRT-PCR?Kit運輸:低溫運輸
保存:-20℃有效期:1年

本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測的即用型 RT-PCR 試劑盒,可以對靶 RNA 分子進行實時定量RT-PCR 分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、逆轉(zhuǎn)錄酶、熱啟動 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑、dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有實時定量 RT-PCR 所需要的成分,用戶只需加入 RNA 模板和引物即可進行染料法實時定量 RT-PCR 反應,具有廣泛的用途。

中文名稱:一步式染料法qRT-PCR試劑盒

英文名稱:One-Step SYBR qRT-PCR Kit

規(guī)格及成分

成 份

塑料袋包裝

2×染料法 qRT-PCR 緩沖液

500 uL(橙色蓋

10×染料法 qRT-PCR 酶混合液

100 uL(紅色蓋

使用手冊

1 份







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運輸及保存



低溫運輸,-20℃保存, 不凍融時保存期限為 12 個月。如果需要每天使用,可在 4℃放置三周。

自備試劑:RNA 模板、引物、超純水。

一步式染料法qRT-PCR試劑盒具有下列特點:

1.以 2×Mix 提供,用戶只需準備模板、引物和 ROX 染料(取決于 qPCR 儀器)即可以進行染料法實時定量 RT-PCR 實驗,非常方便快捷,降低了操作誤差。 2.各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,反應的靈敏度高,特異性強。靈敏度最高時可以達到 50 拷貝/反應(跟模板質(zhì)量,引物設計等相關)。3.靈敏度和專一性比常規(guī) RT-PCR 更高。 4.可用于基因表達分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實驗。也可以用于定性檢測。5.本產(chǎn)品只能用于科研,1mL 足夠 100 次 20uL 體系的染料法 qRT-PCR 反應。


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使用方法:

如果有 N 個樣品并且做定量分析,最好設置 N+7 個反應,多出的 7 個中,6 個是做標準曲線的陽性對照,一個是陰性對照(NC)。在 N+7 個 PCR 管中,加入下列成分。如果是做定性分析,則 6 個做標準曲線的樣品縮減成一個陽性對照(PC),用戶自己需要根據(jù)下表進行適當修改(把 6 個標曲反應改成 1 個陽性對照反應)。

成分N 個樣品管6 個標準曲線管NC 管2×染料法 qRT-PCR 緩沖液 各 10 uL 各 10 uL 10 uL自備引物 1(10uM) 各 1 uL 各 1 uL 1 uL自備引物 2(10uM) 各 1 uL 各 1 uL 1 uLN 個自備模板 RNA 各 1-2 uL 不加 不加自備陽性對照模板(6 個梯度) 不加 各 1 uL(1 管加 1 個梯度) 不加陰性對照模板(水) 不加 不加 1 uL自備 50×ROX I 染料或自備 50×ROX II 染料(見注)各 0.4 uL 各 0.4 uL 0.4 uL10×染料法 qRT-PCR 酶混合液 2 uL 2 uL 2 uL補超純水到 20 uL 20 uL 20 uL

注,下列信息僅供參考,具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準。1、不需要 ROX 的機型:Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、,、Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料,但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。2、需要使用 ROX I 的機型:ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、StepOne Plus。3、需要使用 ROX II 的機型:ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、Corbett RotorGene 3000。2. 放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 下表的擴增參數(shù)僅供參考,一定需要根據(jù)靶分子長度,引物的 Tm 值等進行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法 PCR:


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數(shù)據(jù)處理如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性。一般情況下,陰性對照 Ct 大于或等于 40(閾值需要以陰性對照的 Ct 值確定,此處為便于敘述以 40 為例,具體情況很可能閾值不一樣)。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。


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