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兩管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)

簡要描述:兩管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)是整合 cDNA 第一鏈合成試劑和即用型 PCR 試劑而得的 RT-PCR 試劑盒。cDNA 第一鏈合成反應(yīng)和PCR 反應(yīng)分別在兩個(gè)離心管中進(jìn)行。

  • 更新時(shí)間:2024-06-28
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:1161

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號(hào)YLK10360P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實(shí)驗(yàn)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱Two-Tube RT-PCR Kit運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
保存條件:-20℃有效期:12個(gè)月
自備試劑樣品 RNA、模板專一正向和反向引物

兩管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)說明書

中文名稱:兩管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq

英文名稱:Two-Tube  RT-PCR KitAMV-Taq

本試劑盒是整合 cDNA 第一鏈合成試劑和即用型 PCR 試劑而得的 RT-PCR 試劑盒。cDNA 第一鏈合成反應(yīng)和PCR 反應(yīng)分別在兩個(gè)離心管中進(jìn)行。

規(guī)格及成分:

成分

50次塑料袋包裝

RT試劑盒

50

即用型PCR試劑盒

9 ml

使用手冊(cè)

1

 

 

 

 

 

RT試劑盒成分表:

RT試劑盒成分

50次包裝

MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶(含RT)

100 ul

RTBuffer (含dNTP)

300 ul

OligodT)18引物(0.5ug/ul

50 ul

隨機(jī)引物(0.2ug/ul

50 ul

RNase-free 

10 ml

 

 

 

 

 

 

 

即用型 PCR 試劑盒成分表:

即用型PCR 試劑盒 3.0 成分

600 次包裝

PCR MagicMix 3.0

9 mL

專用染料

360 uL

 

 

 

 

兩管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)具有以下特點(diǎn):

1.即開即用,足夠 50  RT 反應(yīng)(20 uL 體系) 600 PCR 反應(yīng)(30 uL 體系。

2.cDNA 第一鏈合成試劑盒可靈活選用隨機(jī)引物、Oligo dT 引物或基因?qū)R灰?,適合各種情況。

3.PCR 試劑盒具有即用、簡單等優(yōu)點(diǎn),PCR mix 中含上樣染料,所以 PCR 產(chǎn)物可以直接上樣電泳。

4. 兩管式操作,RT PCR 在不同試管中進(jìn)行,便于單獨(dú)優(yōu)化 RT 反應(yīng)或PCR 反應(yīng)條件。

5.擴(kuò)增效率高, 最長可擴(kuò)增 5 Kbp 以上的 RNA。

 

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,-20保存, 有效期一年。

自備試劑

樣品 RNA、模板專一正向和反向引物。

使用方法:

一、樣品 RNA 的制備(本試劑盒不提供相關(guān)試劑)

可用自本公司各種 RNA 提取方法提取樣品的 RNA,也可以選用其他供應(yīng)商的產(chǎn)品,但得到的 RNA 一定要溶解在RNase-free 的超純水中。

二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA

1.按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 uL 體系):

 

RNA 模板


RNA

100-500 ng

 poly(A) mRNA

10-500 ng

或?qū)R坏?span>   RNA(如體外轉(zhuǎn)錄制備的)

0.01 pg-500 ng

引物


Oligo (dT)18(0.5 ug/uL)

1 uL

或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL)

1 uL

或自備模板專一反向引物(10 pmol/uL)

1-2 uL

RNase-free 

補(bǔ)水到 12   uL

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。隨機(jī)引物與 RNA 模板的比例將決定cDNA 合成的平均長度(成反比)。一般情況下隨機(jī)引物效率好于 OligodT 引物,但如果只想轉(zhuǎn)錄總 RNA 中的 mRNA(只占 5%左右),則可優(yōu)先選用 OligodT 引物,這樣就可以排除非mRNA 的干擾。

2.70保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3.按順序加入 6 uL RT Buffer(含 dNTP)和 2 uLMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20 uL

4.42保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5.70保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。

6.合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,不需要純化。剩余樣品可以放置在-20長期保存。

三、PCR30 uL 體系)

1、將全部專用染料加入到PCR MagicMix 3.0 中,輕柔顛倒混勻即可使用。未用完的部分需要在-20。也可以不加專用染料,但在 PCR 結(jié)束后,電泳上樣前,則需要加入電泳上樣液,否則電泳時(shí)沒法判斷電泳速度。

2、在 PCR 管中加入下列成分:

成分

加入量

PCR MagicMix 3.0(已加染料)

15 uL

cDNA 樣品(上步的 RT 反應(yīng)液)

1-5 uL

模板專一性正向引物(10 pmol/uL)

1-2 uL

模板專一性反向引物(10 pmol/uL)

1-2 uL

補(bǔ)水到

30 uL

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

注意:cDNA 也可以稀釋后用作 PCR 模板。是否稀釋或稀釋多少倍wan全取決于靶基因的豐度。

PCR 反應(yīng)參數(shù)(需要根據(jù)模板和引物決定,下面的只做參考)

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

5min

PCR反應(yīng)

35個(gè)循環(huán))

94℃

1min

55℃

1min

72℃

2min

最后延伸

72℃

10min

 

 

 

 

 

 

 

 

四、電泳檢測

1、取 5-0 uL PCR 產(chǎn)物直接在PAGE 或瓊脂糖凝膠上電泳,跟分子量標(biāo)準(zhǔn)比較估計(jì)出擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。注:本試劑盒中的PCR mix 含有甘油和染料,可以直接上樣,不需要

額外再加電泳上樣液。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒

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