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豬鏈球菌實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒

簡(jiǎn)要描述:豬鏈球菌實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒豬鏈球菌(Streptococcus sui)是具有莢膜的一種革蘭氏陽(yáng)性球菌。

  • 更新時(shí)間:2024-07-18
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問(wèn)  量:454

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號(hào)YLK10410P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實(shí)驗(yàn)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
保存條件低溫運(yùn)輸,-20℃保存有效期12個(gè)月
試劑盒說(shuō)明不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用

豬鏈球菌實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒


產(chǎn)品名稱:豬鏈球菌實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒

英文名稱:Streptococcus sui SYBR qPCR Kit

豬鏈球菌(Streptococcus sui)是具有莢膜的一種革蘭氏陽(yáng)性球菌??筛鶕?jù)其細(xì)胞壁抗原成分將其大致歸類為蘭氏分群群鏈球菌。根據(jù)其莢膜抗原(CPS) 的不同,豬鏈球菌被分為 35(1~34 型,1/2 型)種血清型,其中 1,2,7,9 型是豬的致病菌。豬鏈球菌的定植部位為豬的上呼吸道,尤其是扁桃體和鼻腔。部分血清型的豬鏈球菌具有致病性,主要通過(guò)傷口感染??梢鹭i的急性敗血癥腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎等疾病。部分菌株可引起人類感染,造成細(xì)菌性腦炎或引起中毒樣休克綜合征。因此快速檢測(cè)豬鏈球菌具有重要意義。熒光定量PCR 是檢測(cè)傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專門(mén)檢測(cè)豬鏈球菌通用的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供 DNA 模板。

2.特異性高,引物是根據(jù)豬鏈球菌通用高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)擴(kuò)增其他細(xì)菌。

3.引物和擴(kuò)增體系經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。

4.提供無(wú)傳染性的 PCR 陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

5.一管式操作,熒光 PCR 檢測(cè),不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。

6.本產(chǎn)品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。


【試劑組成】

成分

包裝

2×qPCR MagicMix

500ul(棕色管)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

1ml(黃蓋)

豬鏈球菌通用 qPCR 引

物混合液

100ul(白蓋)

豬鏈球菌通用 qPCR 陽(yáng)性對(duì)照

(1×10E8 拷貝/μL)

50ul(黃蓋)

核酸釋放劑

1ml(綠蓋)

使用手冊(cè)

1份

【運(yùn)輸及保存】

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。


【自備試劑】樣品 RNA。


【注意事項(xiàng)】

一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能

污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)

3. 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

 

二、樣品 DNA 的制備

7.用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8.如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送1mlDNA提取的核酸釋放劑,該釋放劑的裂解液可以直接作為PCR 模板,省略了 DNA 提取步驟。其使用手冊(cè)可向客服索取。

 

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9.如果進(jìn)行定量分析,則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做定性分析,則 6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個(gè)做(可以選 4 號(hào),其余樣品不變)。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分:

 

成分

N+2 個(gè)

樣品管

PCR 陰性

對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線

樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

豬鏈球菌通用 qPCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

自備 10×ROX (見(jiàn)注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個(gè)待測(cè)樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

自備超純水

不加

6 μL

不加

7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液

2-7 號(hào))

 

不加

 

不加

6μL2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3

號(hào)管…)

 

 

:ABI7500、7700 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,其他熒光 PCR 儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4MX3000、MX4000RotorGene 3000、RotorGene 6000 LightCycler480) 不需要使用 ROX,則用水替代。

 

11.  蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。

 

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95

10min

PCR 反應(yīng)

40 個(gè)循環(huán)

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 SYBR 通道的熒光信號(hào))

按儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行解曲線分析

 

五、數(shù)據(jù)處理

12.設(shè)定 60-96℃范圍的熔解曲線分析,排除假陽(yáng)性。

13.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

14.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。

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